Identificación molecular y actividad sobre sustratos cromogénicos de la venombina A del veneno de la serpiente peruana Bothrops atrox

  • Gustavo A. Sandoval Laboratorio de Biología Mole- cular, Facultad de Ciencias Bio- lógicas, Universidad Nacional Mayor de San Marcos. Ciudad Universitaria, Av. Venezuela Cdra. 34 s/n. Apartado 110058, Lima 11, Perú.
  • Fanny Lazo Laboratorio de Biología Mole- cular, Facultad de Ciencias Bio- lógicas, Universidad Nacional Mayor de San Marcos. Ciudad Universitaria, Av. Venezuela Cdra. 34 s/n. Apartado 110058, Lima 11, Perú.
  • Edith Rodriguez Laboratorio de Biología Mole- cular, Facultad de Ciencias Bio- lógicas, Universidad Nacional Mayor de San Marcos. Ciudad Universitaria, Av. Venezuela Cdra. 34 s/n. Apartado 110058, Lima 11, Perú.
  • Armando Yarlequé Laboratorio de Biología Mole- cular, Facultad de Ciencias Bio- lógicas, Universidad Nacional Mayor de San Marcos. Ciudad Universitaria, Av. Venezuela Cdra. 34 s/n. Apartado 110058, Lima 11, Perú.
  • Russolina B. Zingali Laboratorio de Hemostasia y Venenos. Departamento de Bioquí- mica Médica. Universidad Federal de Rio de Janeiro. Rio de Janeiro – Brazil.
Palabras clave: Bothrops atrox, enzima similar a trombina, MALDI-TOF, sustratos cromogénicos.

Resumen

En el presente trabajo se ha realizado la identificación molecular de la enzima similar a trombina (EST) del veneno de Bothrops atrox y se ha evaluado su actividad enzimática sobre diversos sustratos sintéticos. La enzima fue purificada utilizando tres pasos cromatrográficos, sobre Sephadex G-75, CM-Sephadex C-50 y Agarosa-PAB, determinándose su peso molecular por PAGE-SDS. La identificación molecular de la enzima aislada se realizó por la técnica de peptide mass fingerprinting basada en espectrometría de masas MALDI-TOF y posterior análisis in silico. Las actividades fibrinocoagulante y amidolítica fueron ensayadas sobre fibrinó- geno bovino y BApNA, respectivamente, así como la hidrólisis sobre los sustratos cromogénicos específicos S-2238, S-2251 y S-2266. Como resultado de los ensayos bioquímicos y estructurales, la EST del veneno de B. atrox, presentó un peso molecular de 29,6 kDa. El análisis mediante espectrometría de masas de los péptidos obtenidos, permitió identificar a esta enzima como una venombina A, presentando una identidad del 75%. Del análisis de actividad enzimática, se obtuvo que la EST de B. atrox produjo coagulación del fibrinógeno bovino y presentó actividad sobre BApNA, S-2238 y S-2266, siendo incapaz de hidrolizar el sustrato S-2251. El empleo de estas aproximaciones estructurales y funcionales ha permitido lograr la identificación molecular del principal componente del veneno de B. atrox relacionado con su acción coagulante, así como evaluar en detalle la naturaleza de su actividad enzimática sobre diversos sustratos.

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Publicado
2011-05-04
Cómo citar
Sandoval, Gustavo A., Fanny Lazo, Edith Rodriguez, Armando Yarlequé, y Russolina B. Zingali. 2011. Identificación Molecular Y Actividad Sobre Sustratos Cromogénicos De La Venombina A Del Veneno De La Serpiente Peruana Bothrops Atrox. Revista Peruana De Biología 17 (3), 365 -70. https://doi.org/10.15381/rpb.v17i3.12.
Sección
Trabajos originales