Evaluación de la Integridad Acrosomal en Espermatozoides Epididimarios de Alpaca mediante Citometría de Flujo

Alejandra Ugarelli, Shirley Evangelista-Vargas, Alexei Santiani

Resumen


El objetivo del presente trabajo fue determinar el porcentaje de integridad acrosomal en espermatozoides epididimarios de alpaca utilizando Arachis hypogaea (PNA) y Pisum sativum (PSA), conjugadas con isoticionato de fluoresceína (FITC). Se recolectaron 45 testículos de alpaca obtenidos del Camal Municipal de Ninacaca, provincia de Pasco (Perú) y se utilizaron 29 muestras recuperadas de la cola del epidídimo con motilidad mayor de 30% y concentración mayor de 50x106 espermatozoides/ml. Los espermatozoides fueron suspendidos con 1 ml de solución Tris base, se lavaron por centrifugación a 600 g por 8 min y los pellets fueron re-suspendidos en 300 μl de PBS. Cada muestra fue dividida en dos alícuotas e incubadas por 8 min a 38 °C con FITC-PNA (0.5 μg/ml) o FITC-PSA (2.5 μg/ml), junto con un marcador de vitalidad (ioduro de propidio [PI], 0.5 μg/ml). Las muestras fueron evaluadas mediante citometría de flujo, utilizando un láser de excitación de 488 nm y canales detectores de emisión de fluorescencia de 505-560 nm (Canal 02 para FITC) y de 642-740 nm (Canal 05 para PI). Los espermatozoides que emitieron fluorescencia verde en el Canal 02 fueron considerados con daño acrosomal, mientras que los que emitieron fluorescencia roja en el Canal 05 fueron considerados muertos. Se obtuvo 59.17 ± 4.84 y 61.13 ± 4.35% de espermatozoides vivos con integridad acrosomal para FITC-PNA y FITC-PSA, respectivamente. Los resultados presentan un indicador de la integridad acrosomal en espermatozoides epididimarios de alpaca, que podría constituir una base para el estudio de la fisiología espermática en esta especie.

Palabras clave


alpaca; espermatozoide; acrosoma; FITC-PSA; FITC-PNA; citometría de flujo

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DOI: http://dx.doi.org/10.15381/rivep.v28i1.12947

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