Desarrollo de una plataforma molecular para la detección y cuantificación del virus vacunal de Newcastle

Phillip Ormeño Vásquez, Luis Tataje Lavanda, Katherine Huamán Gutiérrez, Katherine Calderón, Vladimir Longa Bobadilla, Ángela Montalván, Edison Huaccachi Gonzáles, Manuel Criollo Orozco, Jorge Bendezú, Manolo Fernández Díaz

Resumen


El estudio tuvo por objetivo desarrollar una plataforma molecular para la cuantificación del virus de la enfermedad de Newcastle (NDV) a partir de un sistema de cultivo en huevos embrionados SPF. Primero se evaluaron cuatro pares de cebadores que amplifican diferentes regiones del genoma viral de NDV que codifican para la proteína de nucleocápside (NP), proteína matriz (M), proteína fusión (F) y la ARN polimerasa ARN dependiente (L), con la finalidad de seleccionar el más conservado a partir del cual se desarrolló una plataforma molecular basada en la transcripción reversa - reacción en cadena de polimerasa convencional (RT-PCRc) en dos pasos para la detección del NDV. Posteriormente, esta fue llevada a transcripción reversa - reacción en cadena de polimerasa en tiempo real (RT-qPCR) para la cuantificación de NDV producido a partir de un sistema de huevos embrionados. Mediante estas técnicas se determinó que los cebadores para el gen M fueron adecuados según los criterios de optimización para el desarrollo de ambos métodos. Mediante ensayos de sensibilidad se demostró que la RT-qPCR (116 copias genómicas/μl) era 10 veces más sensible que el RT-PCRc. Los cebadores fueron específicos pues no hubo amplificados en los controles negativos ni en otros patógenos aviares (virus de la laringotraqueitis infecciosa, metapneumovirus aviar, virus de la bronquitis infecciosa, Avibacterium paragallinarum, Gallibacterium anatis y Ornithobacterium rhinotracheale). Debido su sensibilidad y especificidad, se propone esta plataforma para la cuantificación de NDV vacunal cuando es producido a partir de un sistema de huevos embrionados, como una alternativa frente a métodos convencionales de titulación como hemaglutinación, ensayo en placa, TCDI50 y DIEP50.

Palabras clave


NDV; RT-PCRc; RT-qPCR; huevos embrionados SPF

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DOI: http://dx.doi.org/10.15381/rivep.v29i2.14523

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Copyright (c) 2018 Phillip Ormeño Vásquez, Luis Tataje Lavanda, Katherine Huamán Gutiérrez, Katherine Calderón, Vladimir Longa Bobadilla, Ángela Montalván, Edison Huaccachi Gonzáles, Manuel Criollo Orozco, Jorge Bendezú, Manolo Fernández Díaz

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