Expresión recombinante de la pictobina, una enzima similar a trombina presente en el veneno de Bothrops pictus (jergón de costa)

Resumen

Introducción: La expresión recombinante de toxinas de origen ofídico ha permitido potenciar su estudio tanto estructural y funcional, especialmente en sus aplicaciones biomédicas. Pictobina es una enzima similar a trombina del veneno de B. pictus, especie endémica del Perú, que presenta un alto potencial. Objetivo: producir la versión recombinante de Pictobina (rPictobina) en el modelo eucariótico Piccha pastoris, Métodos: Se inició con las síntesis comerciales de la secuencia nucleotídica de Pictobina (750 pb), que incorpora los sitios de restricción EcoR I y Not I. Esta secuencia fue amplificada por PCR, insertada en el vector pPICZα-C y clonada en E. coli OneShot TOP10. Posteriormente, se amplificó el plásmido pPICZα-C–rPictobina para su transformación y expresión en el sistema Pichia pastoris GS115. Resultados: La expresión se logró tras la inducción con metanol al 0,5% durante 7 días. El rendimiento de expresión fue de 0,4 mg/L en P. pastoris. Adicionalmente, el análisis por SDS-PAGE reveló que rPictobina tiene una masa molecular de 49 kDa, y mostró actividad amidolítica pero no acción coagulante sobre el fibrinógeno. Los análisis por ELISA y Western Blot mostraron un bajo reconocimiento de la versión recombinante por los anticuerpos anti-veneno tal de B. pictus. Conclusión: Se logró la producción de la versión recombinante de Pictobina, la cual posee actividad sobre sustrato sintético BApNA específico para serina proteasas, esto permite dar los primeros pasos para la producción heteróloga de esta prometedora biomolécula.