Evaluación de Cuatro Tiempos de Cultivo sobre la Tasa de Maduración y División Post-Fecundación in vitro de Ovocitos de Alpaca

Autores/as

  • Wilfredo Huanca L. Laboratorio de Reproducción Animal, Facultad de Medicina Veterinaria de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos, Lima, Perú
  • Rosario Condori P. Laboratorio de Reproducción Animal, Facultad de Medicina Veterinaria de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos, Lima, Perú
  • María Chileno M. Laboratorio de Reproducción Animal, Facultad de Medicina Veterinaria de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos, Lima, Perú
  • Pedro García H. Departamento de Patología Animal, Unidad de Reproducción Animal, Universidad Santiago de Compostela, España
  • Juan Cainzo C. Departamento de Patología Animal, Unidad de Reproducción Animal, Universidad Santiago de Compostela, España
  • Juan J. Becerra G. Departamento de Patología Animal, Unidad de Reproducción Animal, Universidad Santiago de Compostela, España

DOI:

https://doi.org/10.15381/rivep.v25i4.10782

Palabras clave:

fecundación in vitro, ovocitos, maduración, alpacas

Resumen

Se evaluó el efecto del tiempo de cultivo sobre la tasa de maduración nuclear y tasa de división post-fecundación a 72 horas de ovocitos de alpacas. Complejos Cumulus-Ovocitos (CCOs) fueron obtenidos de ovarios procedentes de animales beneficiados en el camal y transportados a 35 °C en solución salina 0.9% suplementada con antibiótico antimicótico. Los CCOs fueron aspirados de folículos de 2 a 6 mm. Experimento 1: 502 ovocitos fueron distribuidos en cuatro tiempos de maduración (30, 34, 38 y 42 horas) y madurados en TCM-199 suplementado con 10% suero fetal bovino (SFB), 0.5 µg/mL de FSH, 10 µg/mL de hCG, 0.2 mM de piruvato de sodio, 50 µg/mL de gentamicina y 1 µg/mL de E2, y cultivados a 39 ºC bajo una atmósfera de 5% de CO2 y alta humedad. Posteriormente, los ovocitos fueron removidos, lavados con PBS suplementado con 10% de SFB y 1 mg/ml de hialuronidasa y fijados en solución de etanol y ácido acético (3:1). Los ovocitos fueron colocados en portaobjetos, teñidos con 1% de orceína y examinados bajo un microscopio a 400x para determinar la maduración nuclear. Experimento 2: 533 ovocitos fueron cultivados bajo las mismas condiciones del experimento 1 y fecundados con espermatozoides obtenidos de epidídimos. Los espermatozoides fueron centrifugados a 700 g en una gradiente de Percoll discontinua (22.5:45%) por 25 minutos. El sobrenadante fue removido y el pellet (con espermatozoides viables) reconstituido con TL-Stock. Los gametos fueron co-cultivados por 18 horas a 39 ºC con 5% de CO2 en KSOM suplementado con 10% de SFB, 2 mM de piruvato de sodio y 50 µg/mL gentamicina, y evaluados a las 72 horas. En el Experimento 1 se obtuvo el 26.3±5.4, 52.6±6.7, 68.5±10.6 y 75.3±11.9% de ovocitos en Metafase-II para 30, 34, 38 y 42 h de cultivo, respectivamente, con diferencia estadística entre 30 y 34 h respecto a 38 y 42 h (p<0.05). En el Experimento 2, la tasa de división fue 9.5±4.8, 8.1±5.8, 15.6±9.2 y 19.8±8.0% para 30, 34, 38 y 42 h, sin diferencia estadística entre grupos. Los resultados sugieren que los ovocitos de alpacas requieren 38 a 42 h de maduración para obtener estadios de Metafase-II.

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Biografía del autor/a

Wilfredo Huanca L., Laboratorio de Reproducción Animal, Facultad de Medicina Veterinaria de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos, Lima, Perú

Rosario Condori P., Laboratorio de Reproducción Animal, Facultad de Medicina Veterinaria de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos, Lima, Perú

María Chileno M., Laboratorio de Reproducción Animal, Facultad de Medicina Veterinaria de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos, Lima, Perú

Pedro García H., Departamento de Patología Animal, Unidad de Reproducción Animal, Universidad Santiago de Compostela, España

Juan Cainzo C., Departamento de Patología Animal, Unidad de Reproducción Animal, Universidad Santiago de Compostela, España

Juan J. Becerra G., Departamento de Patología Animal, Unidad de Reproducción Animal, Universidad Santiago de Compostela, España

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Publicado

2014-12-30

Cómo citar

Huanca L., W., Condori P., R., Chileno M., M., García H., P., Cainzo C., J., & Becerra G., J. J. (2014). Evaluación de Cuatro Tiempos de Cultivo sobre la Tasa de Maduración y División Post-Fecundación in vitro de Ovocitos de Alpaca. Revista De Investigaciones Veterinarias Del Perú, 25(4), 468–476. https://doi.org/10.15381/rivep.v25i4.10782

Número

Sección

Artículos Primarios