Evaluación de métodos de extracción de ADN genómico para la identificación de Leptospira spp en muestras de orina bovina mediante por PCR

  • Alexandra Paola Revelo Ruales Facultad de Medicina y Zootecnia, Universidad Central del Ecuador, Quito, Ecuador
  • Euclides De La Torre M. Agencia de Regulación y Control Fito y Zoosanitario AGROCALIDAD, Tumbaco, Ecuador
  • Galo Martínez C. Carrera de Medicina Veterinaria y Zootecnia, Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia, Universidad de Guayaquil, Ecuador
  • María Baquero C. Facultad de Medicina y Zootecnia, Universidad Central del Ecuador, Quito, Ecuador
  • Yveth Casart Q. Proyecto Prometeo, SENESCYT, Ecuador
Palabras clave: leptospirosis, diagnóstico, extracción de ADN, Chelex, PCR

Resumen

El presente estudio tuvo la finalidad de seleccionar un protocolo de extracción de ADN de Leptospira spp a partir de muestras de orina para el diagnóstico de leptospirosis bovina mediante PCR. Se utilizaron tres métodos de extracción de ADN: Etanol-Hidróxido de Sodio (EtNa), resina quelante Chelex® 100 y el estuche de extracción comercial PureLink® Genomic DNA Mini Kit. El ADN extraído sirvió para la estandarización de tres protocolos de PCR para la identificación de los genes rrl, hap1 y rrs, respectivamente en el laboratorio de AGROCALIDAD, Ecuador. Se colectaron 72 muestras de orina bovina procedentes de ganaderías de la provincia de Manabí, Ecuador. Se obtuvieron 10 muestras positivas mediante la amplificación del gen rrl, el cual identifica al género Leptospira. De las muestras positivas a género, ocho amplificaron para el gen hap1, el cual codifica para la principal proteína de membrana externa de especies patógenas. Se evaluó la concordancia entre los métodos de extracción de ADN con Chelex-100, y el estuche de extracción comercial PureLink® Genomic DNA Mini Kit, determinándose una concordancia de 0.74 mediante el índice Kappa.

 

El presente estudio tuvo la finalidad de optimizar un protocolo de extracción de ADN de Leptospira spp. a partir de muestras de orina de bovinos procedentes de ganaderías de los cantones de Chone y Pedernales de la provincia de Manabí, Ecuador. El ADN extraído sirvió para la estandarización de 3 protocolos de PCR en AGROCALIDAD, para lo cual, se colectaron 72 muestras de orina bovina (n=72). Se identificaron 10 excretores renales (n=10) mediante la amplificación del gen rrl, el cual identifica al género Leptospira. De las muestras positivas a género, 8 (n=8) amplificaron para el gen hap1, el cual codifica para la principal proteína de membrana externa de especies patógenas. Se evaluó la concordancia entre los métodos de extracción de ADN con Chelex-100, y el estuche de extracción comercial PureLink® Genomic DNA; y se determinó la existencia de una concordancia de 0,74 mediante el índice Kappa.

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Biografía del autor/a

Alexandra Paola Revelo Ruales, Facultad de Medicina y Zootecnia, Universidad Central del Ecuador, Quito, Ecuador

AGROCALIDAD-Dirección de Diagnóstico Animal de la Coordinación General de Laboratorios, Analista de Laboratorio de Microbiología.

Instituto Nacional de Investigación en Salud Pública-INSPI-Dr. Leopoldo Izquieta Pérez, Analista del Centro de Referencia Nacional de Zoonosis (Trabajo actual)

Publicado
2020-06-20
Cómo citar
Revelo Ruales, A., De La Torre M., E., Martínez C., G., Baquero C., M., & Casart Q., Y. (2020). Evaluación de métodos de extracción de ADN genómico para la identificación de Leptospira spp en muestras de orina bovina mediante por PCR. Revista De Investigaciones Veterinarias Del Perú, 31(2), e15522. https://doi.org/10.15381/rivep.v31i2.15522
Sección
Artículos Primarios