CINÉTICA DE EXPRESIÓN DEL FACTOR DE NECROSIS TUMORAL ALFA (TNF-) E INTERLEUCINA 1 ALFA (IL-1) EN MUCOSA INTESTINAL DE CRÍAS DE ALPACA (Vicugna pacos) SANAS Y CON ENTEROPATÍA

Resumen

El objetivo del estudio fue determinar la presencia y niveles de expresión de los ARNm del Factor de Necrosis Tumoral alfa (TNF-α) e Interleucina 1 alfa (IL-α) en mucosa intestinal de crías de alpaca (Vicugna pacos) sanas y con enteropatía. Se trabajaron 71 muestras de yeyuno de alpacas de 0 a 45 días de edad [sanas (n=38) y con enteropatía (n=33)] provenientes del distrito de Maranganí, Cusco. Se extrajo el ARN total de las muestras y se procedió a la transcripción reversa (RT) para obtener las cadenas complementarias de ADN (ADNc). Posteriormente se realizó la PCR convencional y PCR tiempo real. El 98.6% (70/71) de las muestras amplificaron un producto específico de 251 pb para TNF-α y el 100% (71/71) de las muestras amplificaron un producto de 172 pb para IL-1α, demostrados en la electroforesis mediante bandas en gel de agarosa. En la PCR tiempo real, el análisis de las curvas y temperaturas de disociación (Tm) de los productos indicó: a) para TNF-∝, la presencia de un producto específico con una Tm entre 85.1 y 86 ºC en las muestras; b) los productos de la IL-1α fueron específicos con una Tm entre 78.8 y 79.7 ºC. La cuantificación relativa del ARNm, utilizando el método 2 Delta Delta Ct (2^-ΔΔCt), demostró que la expresión de ambas citoquinas fue mayor en alpacas enfermas que en sanas (p<0.05). Los niveles de expresión de ambas citoquinas mostraron una tendencia creciente en las primeras cuatro semanas de vida y una caída paulatina en la quinta y sexta semana en animales sanos, mientras que en animales enfermos no existió asociación entre la expresión de las citoquinas y la edad.