EVALUACIÓN DE LA INTEGRIDAD DE ADN MEDIANTE CITOMETRÍA DE FLUJO EN ESPERMATOZOIDES DE ALPACA CRIOPRESERVADOS CON ANÁLOSOS DE SUPERÓXIDO DISMUTASA.

Autores/as

  • Alexei Santiani A. Laboratorio de Reproducción Animal, Facultad de Medicina Veterinaria, Facultad de Ciencias Biológicas, Universidad Nacional Mayor de San Marcos, Lima, Perú
  • Shirley Evangelista V. Laboratorio de Fisiología de la Reproducción Animal, Facultad de Ciencias Biológicas, Universidad Nacional Mayor de San Marcos, Lima, Perú
  • Carolina Cheuquemán A. Centro de Biotecnología de la Reproducción (CEBIOR), Facultad de Medicina, Universidad de La Frontera, Temuco, Chile
  • Alejandra von Baer H. Criadero Llamas del Sur, Temuco, Chile
  • Jennie Risopatrón G. Centro de Biotecnología de la Reproducción (CEBIOR), Facultad de Medicina, Universidad de La Frontera, Temuco, Chile
  • Raúl Sánchez G. Centro de Biotecnología de la Reproducción (CEBIOR), Facultad de Medicina, Universidad de La Frontera, Temuco, Chile

DOI:

https://doi.org/10.15381/rivep.v23i2.898

Palabras clave:

Criopreservación, espermatozoides de alpaca, superóxido dismutasa, citometría de flujo, ADN, antioxidantes

Resumen

Se evaluó la estabilidad del ADN en espermatozoides de alpaca mediante citometría de flujo en muestras congeladas con antioxidantes análogos de superóxido dismutasa (Tempo y Tempol). Doce muestras de semen de alpaca fueron congeladas utilizando un dilutor en base a leche descremada, fructosa, yema de huevo y etilenglicol. Cada muestra fue dividida en tres porciones: grupo control, grupo Tempo (1 mM) y grupo Tempol (1 mM). Los antioxidantes fueron agregados al dilutor durante la curva de enfriamiento (10 °C). Las muestras fueron descongeladas y fijadas en una solución de formaldehido al 2% y permeabilizadas utilizando una solución de Triton X-100 al 0.8%. La integridad del ADN espermático se evaluó con la técnica de TUNEL y una sonda fluorescente para determinar la viabilidad celular (Ioduro de propidio [PI]). Los espermatozoides marcados con la sonda del TUNEL y PI fueron considerados células permeabilizadas con el ADN fragmentado. Las muestras fueron analizadas mediante citometría de flujo utilizando un láser de 488 nm, contando un mínimo de 10 000 células por muestra y utilizando microscopía de fluorescencia. La frecuencia de espermatozoides con ADN fragmentado en el grupo control (38.8 ± 16.2%) fue significativamente mayor (p<0.05) al grupo Tempol (16.7 ± 8.4%), mientras que los resultados del grupo Tempo (25.4 ± 5.8%) fueron estadísticamente similares a los grupos Control y Tempol. Se concluye que la adición del análogo de superóxido dismutasa, Tempol (1 mM), durante el proceso de criopreservación de espermatozoides de alpaca puede prevenir parcialmente el daño al ADN espermático.

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Publicado

2012-06-29

Número

Sección

Artículos Primarios

Cómo citar

Santiani A., A., Evangelista V., S., Cheuquemán A., C., von Baer H., A., Risopatrón G., J., & Sánchez G., R. (2012). EVALUACIÓN DE LA INTEGRIDAD DE ADN MEDIANTE CITOMETRÍA DE FLUJO EN ESPERMATOZOIDES DE ALPACA CRIOPRESERVADOS CON ANÁLOSOS DE SUPERÓXIDO DISMUTASA. Revista De Investigaciones Veterinarias Del Perú, 23(2), 182-191. https://doi.org/10.15381/rivep.v23i2.898