Capacidad de Dos Líneas Celulares para la Producción de Embriones Clonados mediante Transferencia Nuclear de Células Somáticas

Jenin Cortez, Nilton Murga, Gleni Segura, Lleretny Rodríguez, Héctor Vásquez, Jorge Maicelo-Quintana

Resumen


En este estudio se demuestra el uso de la transferencia nuclear de células somáticas para producir los primeros bovinos clonados en el Perú. Se obtuvieron fibroblastos de piel y células de cúmulos de donantes adultos para ser usados como carioplastos; asimismo, ovocitos obtenidos a partir de ovarios de camal fueron madurados in vitro por 24 h. Los ovocitos madurados se incubaron 2 h en demecolcina (2.5 ìg/ml) para promover la formación del cono con el plato metafásico y para orientar la enucleación manual. Se eliminó la zona pelúcida en pronasa (2 mg/ml) por 3 min. La enucleación fue manual con una microcuchilla dividiendo el óvulo en dos mitades, donde las mitades carentes de núcleo fueron fusionadas por el método «sandwich» (citoplasto–fibroblasto–citoplasto) por electrofusión. Las estructuras reconstruidas se activaron químicamente mediante incubación por 5 min en 7% de etanol absoluto, seguido por 5 h de citocalacina B (5 ìg/ml) y cicloheximida (10 ìg/ml). Las estructuras se cultivaron durante 7 d hasta la fase de incubación/eclosión de blastocisto. Siete blastocistos fueron transferidos a seis vacas receptoras sincronizadas siete días después de la ovulación. Se logró la permanencia de cuatro y tres vesículas embrionarias hasta los días 28 y 60, respectivamente. Dos terneras llegaron a nacer a partir de embriones reconstruidos con células de piel y con células de cúmulos. Mediante el análisis de genotipos, utilizando 15 marcadores (SSR) para bovinos, se confirmó que los terneros clonados fueron derivados de las líneas celulares de las donantes.

Palabras clave


reproducción asistida; bovino; clonación; transferencia nuclear de células somáticas; clonación hecha a mano

Texto completo:

PDF


DOI: http://dx.doi.org/10.15381/rivep.v28i4.13878

Enlaces refback

  • No hay ningún enlace refback.




Copyright (c) 2017 Jenin Cortez, Nilton Murga, Gleni Segura, Lleretny Rodríguez, Héctor Vásquez, Jorge Maicelo-Quintana

Licencia de Creative Commons
Este obra está bajo una licencia de Creative Commons Reconocimiento-NoComercial-CompartirIgual 4.0 Internacional.

 





Facultad de Medicina Veterinaria, Universidad Nacional Mayor de San Marcos, Lima, Perú. Teléfono:(511)4353348 anexo 236; Fax:(511)6197000 anexo 5017