Uso de la técnica SSCP para detectar mutaciones puntuales del ADN mitocondrial humano

  • Alejandro Estrada-Cuzcano Facultad de Ciencias Biológicas, Universidad Nacional Mayor de San Marcos
  • José Sandoval Facultad de Ciencias Biológicas, Universidad Nacional Mayor de San Marcos
  • María L. Guevara-Fujita Instituto de Genética y Biología Molecular, Facultad de Medicina Humana, Universidad de San Martín de Porres, Alameda del Corregidor 1531, La Molina, Lima, Perú
  • Ricardo Fujita Instituto de Genética y Biología Molecular, Facultad de Medicina Humana, Universidad de San Martín de Porres, Alameda del Corregidor 1531, La Molina, Lima, Perú
Palabras clave: SSCP, ADNmt (ADN mitocondrial), mutaciones puntuales, SNP (polimorfismo de un solo nucleótido)

Resumen

En el presente trabajo se evalúa la técnica de SSCP (polimorfismo de conformación de cadena individual de ADN) para detectar mutaciones puntuales, tanto por su sensibilidad en la detección (alrededor 80% en condiciones ideales), como por su implementación fácil y económica. Se utilizaron como controles positivos y negativos, ADN de voluntarios caracterizados previamente para las mutaciones puntuales de 5 RFLPs mitocondriales. Para la optimización de la prueba fueron ensayadas concentraciones variables del tampón TBE (1X y 0,5X) y del glicerol (10%, 5% y 0) en geles de poliacrilamida. Cuatro de los 5 RFLPs fueron detectados en las condiciones utilizadas y pueden ser usados en estudios de rutina sin usar enzimas de restricción. Además, la técnica SSCP permitió determinar mutaciones desconocidas en un segmento de 394 nucleótidos de la región hipervariable (HVI) del ADNmt. Diferencias en correspondencia a los distintos haplotipos fueron detectados e incluso permitió discernir grupos dentro del mismo subtipo. La secuenciación de dos muestras del subtipo B1 con migración diferencial en SSCP, corroboró la existencia de siete nucleótidos distintos

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Publicado
2013-05-31
Cómo citar
Estrada-Cuzcano, Alejandro, José Sandoval, María Guevara-Fujita, y Ricardo Fujita. 2013. Uso De La Técnica SSCP Para Detectar Mutaciones Puntuales Del ADN Mitocondrial Humano. Revista Peruana De Biología 12 (3), 349-58. https://doi.org/10.15381/rpb.v12i3.2410.
Sección
Trabajos originales