Construcción de plásmidos mediante clonación in vivo para la búsqueda y caracterización de oligopéptidos quelantes de hierro en Saccharomyces cerevisiae
DOI:
https://doi.org/10.15381/rpb.v31i2.27218Palabras clave:
Levadura, Biblioteca de plásmidos semi-aleatorios, péptidos semi-aleatorios, péptidos quelantes de hierroResumen
La levadura Saccharomyces cerevisiae es un suplemento nutricional y aditivo alimentario que podría aportar hierro de alta biodisponibilidad. Asimismo, varios estudios han demostrado la viabilidad del uso de oligopéptidos quelantes de hierro para tratar la anemia y por tanto, su producción en células de levadura podría proporcionar ventajosamente un suplemento fácil de usar. En este estudio, se optimizó una estrategia de clonación in vivo para construir una biblioteca de plásmidos semialeatoria que permite la producción de oligopéptidos con seis repeticiones de secuencias Asp/Glu-Asp/Glu-Leu. En éstos, la primera y segunda posición podrían incluir residuos de aspartato o glutamato, mientras que la tercera es siempre leucina. Adicionalmente, varios plásmidos fueron construidos para permitir el estudio de variantes del oligopéptido Arg-Glu-Glu, previamente reportado como quelante de hierro. En cada caso, las construcciones de los plásmidos requeridos se realizaron mediante la estrategia de clonación in vivo en la levadura S. cerevisiae, que se basa en la reparación de brechas en el ADN por recombinación homóloga. El procedimiento implica la cotransformación de células de levadura con el plásmido linealizado y el fragmento a clonar, ambos con secuencias flanqueantes homólogas. Los transformantes resultantes albergan a los plásmidos correctamente ensamblados y comienzan a expresar los genes clonados, permitiendo así el análisis inmediato de los oligopéptidos sintetizados de secuencias conocidas o semialeatorias.
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